Šta se dešava ako dodate previše restriktivnog enzima?
Šta se dešava ako dodate previše restriktivnog enzima?

Video: Šta se dešava ako dodate previše restriktivnog enzima?

Video: Šta se dešava ako dodate previše restriktivnog enzima?
Video: Имба в костюме хряка ► 2 Прохождение Dark Souls remastered 2024, Novembar
Anonim

Može doći do nepotpune probave kada previše ili također malo enzim se koristi. The prisustvo zagađivača u the DNK uzorak mogu naseliti enzime , što također rezultira nepotpunom probavom. Neki restrikcijskim enzimima zahtijevaju kofaktore za punu aktivnost.

Osim toga, zašto se restrikcijski enzimi dodaju posljednji?

The restrikcijski enzim je obično zadnji komponenta dodano na reakciju kako bi se osiguralo da nije izloženo ekstremnim uslovima. Sastavljenu reakciju nakon toga treba promiješati enzim dodatak. Pomiješajte sve otopine koje sadrže restrikcijskim enzimima nježno izbjegavati enzim inaktivacija.

Nadalje, kako se može poboljšati probava restrikcijskih enzima? Ne koristite više od preporučenog enzim količinu (npr. 10 jedinica enzim po mikrogramu DNK). Smanjite količinu enzim u reakciji, ako je potrebno. Izbjegavajte produženu inkubaciju varenje reakcija. Koristite preporučeni pufer za reakciju.

Također znate, zašto se restrikcijski enzim ne bi smanjio?

Priprema DNK za cijepanje trebalo bi ne sadrže zagađivače kao što su fenol, kloroform, alkohol, EDTA, deterdženti ili prekomjerne soli, što sve može ometati restrikcijski enzim aktivnost. Ako je prisutan inhibitor (često sol, EDTA ili fenol), kontrolna DNK će ne rezati nakon miješanja.

Zašto količina enzima može uzrokovati aktivnost zvijezda?

Zvjezdana aktivnost je opuštanje ili izmjena specifičnosti ograničenja enzim posredovano cijepanje DNK koje mogu nastaju pod uslovima reakcije koji se značajno razlikuju od onih optimalnih za enzim . Aktivnost zvijezda može dešava se zbog prisustva Mg2+, as je vidi se u HindIII, na primjer.

Preporučuje se: