Sadržaj:

Kako birate klonove?
Kako birate klonove?

Video: Kako birate klonove?

Video: Kako birate klonove?
Video: Синдбад. Пираты семи штормов. Мультфильм 2024, Novembar
Anonim

Kada biranje a klon , vodite računa da korijenje bude snažno, bijelo i željno viri iz podloge za uzgoj. Ako je korijenje smeđe i smežurano, ili na neki drugi način djeluje neaktivno, vratite ga i potražite bolji.

Osim toga, kako klonirati jednu ćeliju?

  1. Izbrojite ćelije kako biste stavili ~16 000 ćelija u prvu jažicu (A1) ploče sa 96 jažica koja sadrži 200 µL medijuma.
  2. Uklonite 100 µL iz ćelija koje sadrže A1 i pomiješajte s B1, pipetiranjem gore-dolje 3x da se dobro promiješa prije uklanjanja 100 µL i miješanja sa C1, itd.

Takođe, kako birate koloniju ćelija sisara? Stavite ploču pod mikroskop da odaberete nediferencirane zdrave kolonije . Birajte kolonije pomoću pipete P-20 postavljene na 10ul. Pažljivo pick a kolonija bez razbijanja kolonija u samac ćelije i prenesite ga u ploču sa 96 jažica sa tripsinom. Pipetirajte gore-dolje nekoliko puta da biste raspršili kolonija.

Shodno tome, kako se koristi klonski cilindar?

Koristeći sterilne srednje pincete, pokupite a klonirajući cilindar . Lagano pritisnite ravno dno cilindar u glatku silikonsku mast i uklonite naglim okomitim pokretom. Ako se radi ispravno, to će dati ravnomjernu raspodjelu masti na dnu cilindar . Postavite cilindar preko kolonije.

Kako birate kolonije za stabilne ćelijske linije?

Protokol za generiranje stabilnih ćelijskih linija zahtijeva nekoliko koraka kao što je prikazano u nastavku:

  1. Generirajte krivulju ubijanja kako biste odredili optimalnu koncentraciju odabranog antibiotika.
  2. Transficirajte ćelije željenim plazmidnim konstruktom(ima)
  3. Odaberite i proširite stabilne poliklonske kolonije.
  4. Identifikujte pojedinačne klonove ograničenim razrjeđivanjem i ekspanzijom.

Preporučuje se: